则将每条单链作为一个菌落计数 ㊂ 6. 3. 3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时 ,

　　计 算 两 个 平 板 菌 落 数 的 平 均 值, 再将平 6. 4. 1 若只有一个稀释度平板上 的 菌 落 数 在 适 宜 计 数 范 围 内 , ) 按式 ( 计算 : 6. 4. 2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时 , 1 均值乘以相应稀释倍数 , 作为每克或每毫升中菌落总数结果 ㊂

　　6. 2. 3. 2 双歧杆菌计数 根据对待检样品双歧杆菌含量的估计 , 选择 2 个 ~3 个 连 续 的 适 宜 稀 释 度 , 每个稀释度吸取1 m L 样品匀液于灭菌平皿内 , 每个稀释度做两个平皿 ㊂ 稀释液移入平皿后 , 将冷却至 4 8 ħ 的莫 匹 罗 星 锂 盐 和半胱氨酸盐酸盐改良的 MR 转 动 平 皿 使 混 合 均 匀 ㊂3 S 培养基倾注入平皿 约 1 5m L, 6 ħ ʃ1 ħ 厌 氧 培养 7 培养后计数平板上的所有菌落数 ㊂ 从样品稀释到平板倾注要求在 1 2hʃ2h, 5m i n 内完成 ㊂ 根据待检样品嗜 热 链 球 菌 活 菌 数 的 估 计 , 选 择 2 个 ~3 个 连 续 的 适 宜 稀 释 度 , 每个稀释度吸取

　　本标准代替 G 食品安全国家标准 食品微生物学检验 B4 7 8 9. 3 5 2 0 1 0‘ / ‘ ㊂ 进出口食品中乳酸菌检验方法 第 1 部分 : 分离与计数方法 “ S N T1 9 4 1. 1 2 0 0 7 本标准与 G 主要变化如下 : B4 7 8 9. 3 5 2 0 1 0 相比 , 增加了乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明 ; 修改了改良 MR S 培养基成分 ; 修改了平板计数的接种方法和接种量 ㊂

　　样品中所包括乳酸菌菌属 仅包括双歧杆菌属 仅包括乳杆菌属 仅包括嗜热链球菌 同时包括双歧杆菌属和乳杆菌属 培养条件的选择及结果说明 按G B4 7 8 9. 3 4 的规定执行

　　6. 2. 3. 4 乳杆菌计数 根据待检样品活菌总数的估计 , 选择 2 个 ~3 个连续的适宜稀释度 , 每个稀释 度 吸 取 1 m L 样品匀 液于灭菌平皿内 , 每个稀释度做两 个 平 皿 ㊂ 稀 释 液 移 入 平 皿 后 , 将冷却至4 8 ħ 的 MR S琼脂培养基倾 注入平皿约 1 转动平皿使混合均匀 ㊂3 5m L, 6 ħʃ1 ħ 厌氧培养 7 2hʃ2h㊂ 从样品稀释到平板倾注要 求在 1 5m i n 内完成 ㊂

　　沿管壁缓慢注于装有 9 m 6. 2. 1 用1 m L 无菌吸管或微量移液器吸取 1ʒ1 0 样品匀液 1 m L, L 生理盐 , 水的无菌试管中 ( 注意吸管尖端不要触及稀释液 ) 振摇试管或换用 1 支无菌 吸 管 反 复 吹 打 使 其 混 合 均 按 上 述 操 作 顺 序, 做1 每递增稀释 6. 2. 2 另取 1 m L 无菌吸管或 微 量 移 液 器 吸 头 , 0 倍 递 增 样 品 匀 液, 一次 , 即换用 1 次 1 m L 灭菌吸管或吸头 ㊂ 6. 2. 3 乳酸菌计数 6. 2. 3. 1 乳酸菌总数 乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明见表 1㊂ 表 1 乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明

　　6. 1. 1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序 ㊂ ㊂ 解冻 , 时间不超过 1 5m i n

　　每个稀释度做两个平皿 ㊂ 稀释液移入平皿后 , 将冷却至 4 1m L 样品匀液于灭菌平皿内 , 8 ħ 的 MC 培 养基倾注入平皿约 1 转动平皿使混合均匀 ㊂3 培养后计数 ㊂ 嗜热 5m L, 6 ħʃ1 ħ 需氧培养 7 2hʃ2h, 链球菌在 M 菌落中等偏小 , 边缘整齐光滑的红色菌落 , 直径 2mmʃ 菌 C 琼脂平板上的菌落特征为 : 1mm, 落背面为粉红色 ㊂ 从样品稀释到平板倾注要求在 1 5m i n 内完成 ㊂

　　则 不 宜 采 用, 而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释 6. 3. 2 其中一个平板有较大片状 菌 落 生 长 时 , 代表一个平板菌落数 ㊂ 2, 6. 4 结果的表述 度的菌落数 ; 若片状菌落不到平板的一半 , 而其余一半中菌落分布又很 均 匀 , 即可计算半个平板后乘以

　　中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局

　　同时包括乳杆菌属和嗜热链球菌 同时包 括 双 歧 杆 菌 属 , 乳杆菌属和嗜热链 球菌

　　平板 ( 含适宜范围菌落数的平板 ) 菌落数之和 ; 第一稀释度 ( 低稀释倍数 ) 平板个数 ; 第二稀释度 ( 高稀释倍数 ) 平板个数 ; ㊂ 稀释因子 ( 第一稀释度 )

　　则 对 稀 释 度 最 高 的 平 板 进 行 计 数, 其他平板可 6. 4. 3 若所有稀释度的平板上菌落 数 均 大 于 3 0 0C F U, 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数 6. 4. 4 若所有稀释度 的 平 板 菌 落 数 均 小 于 3 0C F U, 包括液体样品原液 ) 平板均无菌落生长 , 则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算 ㊂ 6. 4. 5 若所有稀释度 ( 则以最接近 3 3 0 0C F U 时, 0C F U 或3 0 0C F U 的平均菌落数乘以稀释倍数计算 ㊂ 6. 5 菌落数的报告 计算 ㊂ 记录为多不可计 , 结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算 ㊂